为了探索以前未被认识的肿瘤胎儿免疫耐受机制，交叉分析了来自不同TME和胎盘的14个单细胞RNA测序(scRNA-seq)数据集，重点分析了肿瘤和滋养细胞的“非自体”细胞成分。考虑到主要组织相容性复合体(MHC)和辅助分子在免疫应答中的重要性，我们评估了MHC、关键B7家族成员和TNF家族成员的表达模式。

该分析证实了先前报道的在肿瘤和滋养细胞中表达的关键基因。例如，在肿瘤细胞中发现高纤维蛋白原样蛋白1 (FGL1)表达，在胎盘滋养细胞中发现高HLA-G表达。有趣的是，B7-H4 V-Set Domain Containing T Cell Activation Inhibitor 1 (VTCN1)在TME和胎盘滋养层细胞的肿瘤细胞中被列为高表达的基因。因此，B7-H4转录本在TME和胎盘的主要细胞成分中均有表达。

将分析扩展到肿瘤免疫单细胞中心2 (TISCH2)数据库，比较B7-H4和PD-L1 (B7-H1, CD274)的表达模式。B7-H4主要在肿瘤细胞中表达，而包括髓系细胞在内的不同细胞类型均广泛表达PD-L1。在许多癌症类型中，B7-H4转录物水平最高的是源于女性生殖器官的癌症，如乳腺癌和卵巢癌。

该scRNA-seq数据分析与来自癌症基因组图谱(TCGA)的大量RNA-seq数据一致，显示乳腺癌、卵巢癌和子宫内膜癌中B7-H4转录物水平最高。乳腺癌和子宫内膜癌中检测到高水平的B7-H4蛋白，宫颈癌中检测到中等水平的B7-H4蛋白。因此，B7-H4转录物和蛋白在泛妇科癌症中高度表达。

在母胎界面，B7-H4主要由滋养细胞表达。人类滋养细胞由解剖学和功能上不同的亚群组成，包括绒毛外滋养细胞(EVTs)、绒毛细胞滋养细胞(VCTs)和合胞滋养细胞(SCT)。我们分析了人类妊娠早期滋养细胞亚群中B7-H4转录本的表达，这是建立母胎免疫耐受的关键阶段。HLA-G主要在EVTs中表达，CD274在EVTs和SCT中表达，VTCN1在所有三个滋养细胞亚群中表达。在体外分化的EVTs中也检测到VTCN1转录本。

免疫组化(IHC)染色显示，人妊娠早期受胎细胞(POCs)的HLA-G+EVTs表达B7-H4蛋白。多重免疫组化染色显示B7-H4和HLA-G在EVTs中同时表达。滋养细胞JEG-3(人胎盘绒毛膜癌细胞系)也同时表达HLA-G和B7-H4。vct和SCT表达不同水平的B7-H4蛋白。与先前的报道一致，羊膜上皮细胞也表达B7-H4，在人母胎界面提供了另一种B7-H4+细胞类型。