对照：肽序列HVLVMCAT （HV3）被证明靶向VCP/mtHtt相互作用，由于缺乏细胞穿透能力，该序列与细胞穿透性HIV衍生的TAT肽偶联，产生活性的HV3-TAT肽。HV3-TAT肽可阻断mthtt诱导的VCP转位至线粒体，从而使神经元免受线粒体破坏。虽然这种肽显示出有效的靶标结合，但它受到快速酶清除的限制。这些局限性（较差的药代动力学特性和有限的细胞穿透性）通常困扰着基于肽的治疗方法。快速的肾脏清除率与体内稳定性下降和极易被蛋白水解酶快速降解相结合，导致肽基药物的整体性能较差，在转化为临床应用方面存在很大障碍。这个研究以HV3-TAT肽作为参照。HV3肽被修饰以防止二硫键，并通过添加带电残基以增强细胞摄取。

作者合成了四个肽序列，连接到norbornene衍生物，并进行聚合。采用核磁共振和多角度光散射色谱对PLPs （P1-P4）进行了表征。用HV3-TAT或PLPs处理HdhQ111和HEK293T细胞，评估细胞活力、蛋白结合、线粒体定位和形态。采用生物层干涉法测定VCP的结合亲和力。

采用凝胶电泳和高效液相色谱法检测P1蛋白对蛋白酶、胰糜蛋白酶、弹性蛋白酶和胃蛋白酶的水解稳定性。评估血清稳定性。采用荧光EDANS-DABCYL法评估酶耐药性，采用高效液相色谱法检测肝微粒体降解情况。在HdhQ111细胞中检测处理后的生物活性。

通过活化凝血时间（ACT）和溶血活性评估血液相容性，评价P1和HV3-TAT对血液凝固和红细胞稳定性的影响。C3a酶联免疫吸附试验测试了治疗剂量和高剂量的补体活化。对于体内药代动力学和生物分布，钆标记P1在小鼠静脉注射后的血液和组织中进行了定量。对健康野生型小鼠进行了为期两个月的毒性评估。小鼠模型分别用P1、HV3-TAT或生理盐水进行疗效测试，并评估运动协调性、体重和神经病理学。Western blot和免疫组织化学分析神经元标记物、mtHtt聚集和VCP线粒体易位。